Conoscenza delle tecniche e metodologie di base della Biochimica applicata. Applicazioni delle metodologie di indagine biochimica e molecolare in campioni umani. Conoscenza degli strumenti analitici e diagnostici di laboratorio nell’ambito della biochimica applicata alla clinica. Applicazioni delle metodologie biochimiche e molecolari per lo studio dei parametri fisiopatologici nell’uomo a scopo diagnostico Produzione di proteine ricombinanti umane per scopi terapeutici
Biochimica clinica essenziale.
Elisabetta Albi, Tommaso Beccari, Samuela Cataldi
Ed Zanichelli ISBN 978-88-08-72057-3
Metodologie biochimiche
Maria Carmela Bonaccorsi Di Patti, Roberto Contestabile, Martino Luigi Di Salvo
Ed Zanichelli ISBN: 9788808712448
Obiettivi Formativi
Il corso si prefigge l'obiettivo di istruire lo studente relativamente ai principi generali della Biochimica applicata e molecolare. Il corso fornisce competenze teoriche e scientifiche per lo studio dei parametri biochimici in campioni biologici anche in rapporto ai diversi stati fisiopatologici dell’uomo
Prerequisiti
Il corso richiede conoscenze di biochimica generale e molecolare.
Metodi Didattici
lezioni in presenza
Modalità di verifica apprendimento
L'esame finale consiste in una prova orale volta ad accertare la conoscenza delle tecniche biochimiche e molecolari di base e alla conoscenza dell’applicazione delle tecniche biochimiche e molecolare per il monitoraggio dei parametri fisiopatologici nell’uomo. Sarà valutata la capacità di ragionamento e l’utilizzo di un lessico specializzato. La votazione finale risulta dall'insieme di questi contributi considerati importanti indicatori della adeguatezza del livello di apprendimento conseguito e del raggiungimento dei risultati di apprendimento previsti dal corso.
Programma del corso
Spettrofotometria. Leggi dell'assorbimento della luce. Saggi colorimetrici. Spettrofluorimetria: principi e applicazioni. Luminescenza: principi e applicazioni. Preparazione e manipolazione di campioni biologici. Rottura di cellule; preparazione e purificazione di organelli cellulari. Centrifugazione per separazione di organelli cellulari, purificazione di acidi nucleici. Cenni di colture cellule eurariotiche e batteri. La cinetica enzimatica. Equaz. di Michaelis-Menten. Cinetica enzimatica applicazioni e pratica. Metodi di dosaggio degli enzimi. Tecniche immunochimiche. Produzione di Anticorpi mono e poli-clonali. Applicazioni: dosaggi RIA e ELISA, immunoistochimica. Tecniche elettroforetiche: concetto di mobilità elettroforetica e relazione tra mobilità, carica, campo elettrico applicato, dimensioni. Relazione tra punto isoelettrico e mobilità delle proteine Elettroforesi per proteine in condizioni native o denaturanti. Isoelettrofocalizzazione, Elettroforesi mono e bidimensionale. Western-blotting. Procedure preliminari per la purificazione delle proteine considerazioni generali, precipitazione frazionata delle proteine (salting in and salting out). Tecniche cromatografiche: generalità e definizioni. Caratteristiche ed applicazioni delle cromatografie: di scambio ionico, di esclusione dimensionale (con esempi di determinazione del peso molecolare di proteine), di cromatografia di affinità (con esempi di ligandi e strategie generali per il legame covalente dei ligandi alla fase stazionaria. Esempi di strategie di purificazione di proteine. Tecnologia del DNA ricombinante. Le tecniche di base del clonaggio del DNA. Tecniche per l’identificazione di acidi nucleici eDNA. Microarray. Amplificazione del DNA mediante Polymerase Chain Reaction (PCR), RT-PCR. Elettroforesi di acidi nucleici. Produzione e purificazione di proteine ricombinati ed esempi di applicazioni farmacologiche. Anticorpi ricombinanti umani. ScFv e hVH.
Applicazioni delle metodologie biochimiche per lo studio dei parametri biochimici nell’uomo
• Emoglobinopatie. Proteine seriche. Profilo della coagulazione e assetto coagulativo.
• Lipidi e lipoproteine. Dislipidemie. Profilo lipidico e rischio cardiovascolare. Misure di laboratorio dei vari lipidi.
• Carboidrati e diabete. Regolazione della glicemia. Diabete mellito. Sindrome metabolica. Metodi di laboratorio. Glucometri.
• Markers di funzionalità cardiaca. Mioglobina. Creatina Chinasi isoenzimi. LDH. Troponine. Marcatori meno comuni.
• Dosaggi Endocrinologici. Disordini pancreatici. Ghiandole surrenali. Tests di funzionalità tiroidea. Ipotalamo.
• Markers di funzionalità epatica ed interpretazioni. Transaminasi. Ittero. Misurazioni di bilirubina e altri dosaggi.
• Tests di funzionalità renale. Misurazione della creatinina a altri dosaggi correlati. Creatinina. Urea e acido urico.
• Errori congeniti del metabolismo. Disordini del metabolismo aminoacidi. Disordini del metabolismo dei carboidrati: galattosemia, accumulo glicogeno. Intolleranza al lattosio. Disordini nel metabolismo urea. Disordini mitocondriali, lisosomi. Metabolismo del ferro.
• Introduzione ai Markers tumorali ed esempi.
• Dosaggio di droghe d’abuso in urine e altri fluidi biologici. Dosaggio dell’etanolo.